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山东黄瓜基地|黄瓜白皮与绿皮是由哪个基因控制的？

本基地以黄瓜WD3×B-2-2构建了F2杂交群体，采用BSA(BulkedSegregantAnalysis)法结合SRAP(Sequence-relatedAmplifledPolymorphism，SRAP，序列相关扩增多态性)分子标记技术，山东黄瓜|寻找与黄瓜果皮绿色性状相关的分子标记。

研究结果如下：

1.以绿皮黄瓜“WD3”和白皮黄瓜“B-2-2”为父母本杂交得到F1代，F1代经自交得到F2代，F2代种植123株。

2.对F2代单株上所有果实果皮进行叶绿素含量的测定，山东黄瓜|根据果皮叶绿素含量将叶绿素含量在0.07～0.08mg·kg-1确定为绿皮株，叶绿素含量在0.005mg·kg-1以下的确定为白皮株。得到绿色果皮植株94株，白色果皮植株29株。绿皮株和白皮株的比例接近3:1，说明绿皮相对于白皮为完全显性。

3.采用改良的CTAB(三甲基十六烷基溴化铵法)，以黄瓜幼嫩叶片为材料提取黄瓜基因组DNA,经1％琼脂糖凝胶电泳检测，结果表明提取的DNA条带完整、质量好。

4.采用集群分离分析法(BSA)按DNA浓度将10株纯绿皮株等量混合，山东黄瓜|构建绿皮DNA池；将10株白皮株等量混合构建白皮DNA池。用380条SRAP随机引物对黄瓜的绿皮池和白皮池进行扩增，其中具有差异带(绿皮植株有而白皮植株没有的)的引物共有2对。

5.用上述2对引物对F2代单株进行验证，*终确定所获得的2个多态性标记，即ME9EM1-309和ME8EMl4-425，山东黄瓜|它们都能扩增出与绿色性状相关的标记。它们对F2群体色泽验证的符合率分别为93.4％和96％。经JOINMAP3.0计算，ME9EM1.309与黄瓜果皮绿色基因的遗传距离为6cM。

6.ME8EM14-425与黄瓜果皮绿色基因的遗传距离为8.3cM。将获得的特异片段进行回收、克隆和测序。目标条带与载体连接和转化后，进行菌落PCR检测，山东黄瓜|结果表明，此标记转化菌株的插入片断和目的片断大小一致，说明所克隆是目的片断。

7.采用Blast软件在GeneBartk数据库中进行查询，未发现与所获得的两个标记片段相似性高于20％的序列，说明这两个片段为新发现的黄瓜DNA序列。



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